– kontrolni antigeni za razvoj in validacijo protiteles
PrEST Antigens™ so unikatno zasnovani rekombinantni fragmenti proteinov (50–150 aminokislin), ki služijo kot imunogeni za Triple A in PrecisA protitelesa ter kot kontrolni reagenti v aplikacijah (IHC, WB, ICC-IF). Zasnova PrEST zagotavlja visoko specifičnost brez navzkrižne reaktivnosti in omogoča raziskovalcem zanesljivo validacijo rezultatov.
ZAKAJ “PrEST Antigens”™?
Ime izhaja iz Protein Epitope Signature Tags.
Unikatna zasnova fragmentov: Z bioinformatsko analizo so izbrani oligonomi, ki vsebujejo 3–5 epitopov in imajo nizko podobnost z drugimi proteini — za visoko specifičnost brez navzkrižne reaktivnosti.
Dvojna uporabnost: PrEST antigeni so del postopka imunizacije pri proizvodnji protiteles in hkrati omogočajo izvedbo kontrolnih ali blokirnih testov v aplikacijah kot so IHC ali WB.
Protokoli zanesljivosti: Standardni postopek pred-adsorpcije (antigen + protitelo) zagotavlja, da signal v IHC ali WB izhaja iz specifične vezi — kar povečuje zaupanje v rezultate.
Validacija in Transparentnost
Izbor fragmenta: PrEST antigeni so izbrani z bioinformatsko analizo — prednost imajo fragmenti (50–150 aminokislin) z minimalno sekvenčno podobnostjo drugim človeškim proteinom, brez signalnih peptidov in transmembranskih regij.
Verifikacija klonov: Plazmidi, ki vsebujejo PrEST fragment, se potrdijo s sekvenciranjem, kar zagotovi pravilnost zaporedja.
Rekombinantna ekspresija in prečiščevanje: PrEST fragmente izražajo v E. coli in prečistijo z IMAC (His‑tag), pod denaturacijskimi pogoji.
Analiza čistosti: Prečiščen antigen se analizira z masno spektrometrijo (ESI‑MS) za potrditev molekulske mase, čistost pa se oceni s SDS‑PAGE (> 80 %) ter kvantificira.
Predadsorpcijski test: Uporaba PrEST antigenov v IHC in WB kot pred-adsorpcijska kontrola omogoča zanesljivo preverjanje specifičnosti signalov.
Kaj to pomeni v praksi?
Validacija: PrEST antigen predstavlja pozitivni kontrolni reagent, ki potrjuje, da je signal, reproduciran z ustreznim protitelesom, resnično specifičen.
Specifičnost in vsestranskost: Kratek antigen z več epitopi je optimiziran za minimalno navzkrižno reaktivnost, hkrati pa deluje v različnih aplikacijah (IHC, WB, ELISA, ICCIF).
Zanesljivost: Ker gre za rekombinantne fragmente s strogo kontrolo čistoče (>80 %) in identitete, omogočajo ponovljive rezultate in sledljivost v dolgoročni projektih.
Uporaba
Pred-adsorpcijski testi: PrEST antigeni se uporabljajo v IHC in WB kot kontrolni reagent – če predadsorpcija zmanjša signal, to potrjuje specifičnost protitelesa.
Aplikacijski nadzor: PrEST antigeni so primerni za validacijo protiteles (IHC, WB), optimizacijo ELISA, in kot QC referenčni standardi.
QPrEST standardi
Atlas Antibodies ponuja tudi QPrEST™ standardne peptide, posebej s težkimi izotopi označene PrEST fragmente, ki služijo kot kvantitativni standardi za absolutno določanje koncentracije proteinov v proteomskih analizah z masno spektrometrijo. Ti produkti so namenjeni predvsem raziskovalcem, ki izvajajo ciljno proteomiko in potrebujejo referenčne peptide za natančno kvantifikacijo.
